ukurasa_bango

Habari

Maswali Yanayoulizwa Mara Kwa Mara kuhusu Utamaduni wa Kiini

1. Nikipokea bomba la seli zilizogandishwa, je, ninaweza kuiweka moja kwa moja kwenye nitrojeni kioevu kwa ajili ya kuhifadhi?

Mara nyingi, seli zinazosafirishwa kwenye barafu kavu (-80°C) zinaweza kurejeshwa kwenye nitrojeni kioevu na kisha kuyeyushwa haraka baadaye.Hata hivyo, uhai wa seli unaweza kupunguzwa baada ya matibabu hayo.Kwa baadhi ya mistari nyeti ya seli, hii inaweza kufanya urejeshaji wa seli kuwa mgumu zaidi.Jambo hili linafikiriwa kuwa ni kutokana na mabadiliko katika muundo wa fuwele za barafu ndani ya seli kutokana na mabadiliko ya joto.Kwa hivyo inashauriwa kuwa seli zinapaswa kuyeyushwa na kukuzwa haraka iwezekanavyo baada ya kupokelewa.Punguza muda wa kuhifadhi kwa -80°C.Halijoto hii inatumika tu kwa usafiri.

Utamaduni wa Kiini Unayoulizwa Mara kwa Mara 1
Utamaduni wa Kiini Unayoulizwa Mara kwa Mara 2
Utamaduni wa Kiini Unayoulizwa Mara kwa Mara 4
Utamaduni wa Kiini Unayoulizwa Mara kwa Mara 3

2. Ni hatua gani za usalama zinapaswa kuchukuliwa wakati wa kuondoa seli kutoka kwa nitrojeni kioevu kwa ajili ya kurejesha?

Cryotube za seli katika nitrojeni kioevu ambayo haijazibwa kabisa na ina nitrojeni kioevu inayovuja ndani yake inaweza kusababisha mlipuko ikiwa halijoto ya kiribaro itapanda kwa kasi wakati wa kuyeyusha.Kwa hiyo inashauriwa kuwa glasi na glavu za kinga huvaliwa wakati wa kuondoa seli kutoka kwa nitrojeni kioevu.Kwa kufufua, bomba la kufungia linapaswa kutikiswa kwa kuendelea katika umwagaji wa maji wa 37 ° C ili kufuta kabisa suluhisho la kufungia ndani ya dakika 1-2.Baada ya hayo, futa nje ya bomba na kuifuta pombe, kisha uipeleke kwenye meza iliyosafishwa kabisa na uhamishe seli kwenye bomba la centrifuge na 10 ml ya njia ya kitamaduni iliyoongezwa, centrifuge saa 1000 rpm kwa dakika 5-10, tupa isiyo ya kawaida, ongeza kiasi kinachofaa cha njia ya utamaduni na chanja chupa ya kitamaduni na uangulie kwenye incubator ya CO2 ya 5%.

3. Kwa nini seli zinapaswa kuhifadhiwa katika awamu ya mvuke ya tank ya nitrojeni kioevu badala ya awamu ya kioevu?

Seli zilizohifadhiwa katika awamu ya gesi ya nitrojeni kioevu zina uwezekano mkubwa wa kufufuliwa.Ambapo katika awamu ya kioevu ya nitrojeni ya kioevu, ikiwa mirija ya lyophilisation haijazibwa ipasavyo au ina uvujaji, mgusano wa moja kwa moja kati ya seli na nitrojeni kioevu unaweza kuhatarisha uhai wa seli baada ya kuyeyuka.

4. Kwa seli za kusimamishwa, ninabadilishaje njia ya utamaduni?

Kukuza seli za kusimamishwa kunaweza kufanywa kwa kuongeza tu kati mpya (ikiwa nafasi inaruhusu) au kwa kutenganisha seli kutoka kwa njia ya zamani kwa centrifugation (100 xg kwa dakika 5) na hatimaye kusimamisha seli zinazoendelea katika kati safi.Walakini, kwa mistari mingi ya seli iliyosimamishwa, kuongeza tu kati ni njia bora.Vyovyote vile, kati inahitaji kusasishwa kabla ya seli kufikia msongamano wao mkubwa zaidi wa kueneza.Msongamano wa seli hutofautiana kati ya 3 x 10 5 na 2 x 10 6 kulingana na mstari wa seli na hali ya utamaduni (kupumzika au kuchochea, viwango vya oksijeni, nk).Seli lazima zichanganywe hadi ukolezi mdogo wa seli ili kuruhusu urejeshaji wa kutosha wa virutubishi ili kuweka seli kukua kwa mpangilio.Ikiwa kati inabadilishwa tu bila kupunguza wiani wa seli, seli zitapunguza haraka kati na kufa.Ikiwa seli zimepunguzwa chini ya msongamano wao mdogo, zitaingia kwenye awamu ya lag na kukua polepole sana au zitakufa.Kila mstari wa seli uliosimamishwa una msongamano tofauti wa kueneza na muda wa kupita, kwa hivyo hesabu za seli za kila siku ndizo njia ya kufuatilia mistari ya seli iliyosimamishwa*.

5. Ni kiwango gani cha CO2 kinachopendekezwa kwa utamaduni wa seli?

Ingawa viwango vya CO2 katika mifumo ya utamaduni wa seli huanzia 0.03% hadi 40% (kawaida karibu 0.03% CO2 katika angahewa), ni kawaida sana kutokuwa na CO2 iliyoongezwa hewani au mkusanyiko wa CO2 wa 5% hadi 10%.Ni muhimu kurekebisha mkusanyiko wa bicarbonate ya sodiamu katikati ili kusawazisha na kiwango cha CO2 katika awamu ya gesi.Seli huzalisha CO2 na zinahitaji kiasi kidogo cha asidi ya kaboni kwa ukuaji na maisha.Ikiwa hakuna CO2 iliyoongezwa na seli zinazidisha, 4 mM (0.34 g/L) ya bicarbonate ya sodiamu isiyo na maji inaweza kutumika.Walakini, kifuniko cha chupa ya kitamaduni kinapaswa kuimarishwa wakati huu.Ikiwa mfumo wa utamaduni unahitaji 5% au 10% CO2, tumia 23.5 mM (1.97 g/L) au 47 mm (3.95 g/L) bicarbonate ya sodiamu katika 37°C, mtawalia, na pH ya awali ya takriban 7.6.Chini ya hali hizi, chupa inapaswa kuachwa bila kufungwa au sahani ya Petri inapaswa kutumika kudumisha usawa wa gesi.

6. Kwa nini baadhi ya seli zinahitaji pyruvate ya sodiamu?Je, ni kiasi gani cha pyruvate ya sodiamu ninapaswa kuongeza kwa kati?

Pyruvate ni kimetaboliki ya asidi kikaboni katika njia ya glycolytic* ambayo huingia kwa urahisi na kuondoka kwenye seli.Kwa hiyo, kuongezwa kwa pyruvate ya sodiamu kwa kati hutoa chanzo cha nishati na chanzo cha kaboni kwa anabolism, husaidia kudumisha seli fulani maalum, husaidia kwa cloning ya seli au inahitajika wakati viwango vya serum katika kati vinapunguzwa.Piruvati ya sodiamu pia husaidia kupunguza cytotoxicity inayosababishwa na fluorescence.Piruvati ya sodiamu kawaida huongezwa kwenye mkusanyiko wa mwisho wa 1 mM.miyeyusho ya pyruvate ya sodiamu inayouzwa kibiashara kwa kawaida ni myeyusho wa uhifadhi wa milimita 100 (100X).

Imetafsiriwa na www.DeepL.com/Translator (toleo lisilolipishwa).


Muda wa kutuma: Juni-21-2022